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EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒

簡要描述:EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性,此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。

  • 產(chǎn)品型號:AC11L262
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2025-05-05
  • 訪  問  量:2210

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合

 

EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒

產(chǎn)品描述
細(xì)胞增殖是評價細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見,能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中,通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng),把熒光基團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性,此技術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。
傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,大小卻只有BrdU抗體的1/500,很容易在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散;無需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。
訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格價格
EdU細(xì)胞增殖流式檢測試劑盒AC11L262
20 T1280

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品組分規(guī)格
EdU溶液80 μL
反應(yīng)緩沖液2 mL
催化劑溶液800 μL
TAMRA 紅色熒光溶液50 μL
緩沖添加劑400 mg
Hoechst 3334240 μL

運輸與保存
常溫運輸。4℃保存,有效期12個月。
使用方法
細(xì)胞培養(yǎng)
將細(xì)胞接種于孔板中(以下溶液加入量是以6孔板為例),培養(yǎng)至正常生長階段。
藥物處理
根據(jù)實驗需要進(jìn)行各種細(xì)胞處理。
EdU標(biāo)記
1.設(shè)置1個不加EdU標(biāo)記培養(yǎng)基的NC對照組,以便進(jìn)行流式檢測數(shù)據(jù)的背景分析。
2.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。
3.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱,然后將500微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合,獲得6孔板中每孔1ml 1×EdU溶液。
【注】:①不建議替換全部培養(yǎng)基,這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度;②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,用量以沒過細(xì)胞為宜。
4.孵育細(xì)胞2 h,棄培養(yǎng)基。
【注】:①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài);②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。
5.將細(xì)胞收集至流式管中,1000rpm 離心5 min,用槍頭吸棄上清。
【注】:①如貼壁細(xì)胞,請先消化收集;②離心轉(zhuǎn)速可按特定細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗進(jìn)行設(shè)置。
6.以1×PBS清洗細(xì)胞,1000rpm 離心5 min,用槍頭吸棄上清。
細(xì)胞的固定和通透
1.每管加入1mL 4%多聚甲醛細(xì)胞固定液固定15-30 min,1000rpm 離心5 min,棄固定液。
2.每管加入2mL 2mg/mL 甘xx,搖床孵育5 min,以中和過量的多聚甲醛。
3.1000rpm 離心5 min,棄甘xx溶液,每管加入2mL PBS洗液清洗,1000rpm 離心5 min,棄上清。
4.每管加入1mL 0.5% Triton X-100細(xì)胞通透液,室溫通透10 min,1000rpm 離心5 min,棄細(xì)胞通透溶液。
5.每管加入2mL PBS洗液,室溫清洗5 min,1000rpm 離心5 min,吸棄上清。
EDU染色
1.通過用10:1去離子水稀釋反應(yīng)緩沖液,進(jìn)行配制1×反應(yīng)緩沖液。
2.按照溶解 200 mg緩沖添加劑溶于1 mL去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
【注】:緩沖添加劑為白色粉末,較難準(zhǔn)確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應(yīng)超過±20%,且該粉末較易氧化,使用后請旋緊管蓋,如試劑出現(xiàn)棕黃色,則需報廢或更換。
3.按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制:

染色反應(yīng)液組分500 μL1 mL2 mL5 mL
1X反應(yīng)緩沖液430 μL860 μL1.8 mL4.3 mL
催化劑溶液20 μL40μL80 μL200 μL
TAMRA紅色熒光溶液1.2 μL2.5 μL5 μL12.5 μL
緩沖添加劑50 μL100 μL200 μL500 μL

4.每管加入配置好的檢測混合液,體積以覆蓋細(xì)胞為宜,充分重懸細(xì)胞,避光、室溫孵育10-30 min。
5.1000rpm 離心5 min,吸棄染色反應(yīng)液,每管加入2mL 0.5% Triton X-100細(xì)胞滲透液清洗2次,每次10 min;離心棄細(xì)胞滲透液,用500uL PBS重懸細(xì)胞。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號:AC12L021)PBS溶液1:1000進(jìn)行稀釋得到1×Hoechst染色液。
2.每管加入1×Hoechst染色液,以覆蓋細(xì)胞為宜,室溫避光孵育10-15 min后,棄染色液。
3.加入500 μL PBS重懸細(xì)胞。
其它染色(自備)
(可選)可以根據(jù)實驗需要進(jìn)行細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)抗原的抗體染色。染色完的樣品上機(jī)檢測時,根據(jù)使用的染料選擇合適的通道檢測。
流式檢測及分析
1.建議染色完成后立即進(jìn)行流式檢測;如果條件限制,請于4℃條件下避光濕潤保存3 d之內(nèi)完成檢測。
2.檢測細(xì)胞數(shù)量建議盡量能達(dá)到107級,若細(xì)胞數(shù)量較少,檢測的細(xì)胞數(shù)量可調(diào)整為106起始進(jìn)行實驗。

熒光染料最大激發(fā)波長最大發(fā)射波長熒光顏色
TAMRA541 nm567 nm橘紅色熒光
Hoechst 33342350 nm461 nm藍(lán)色熒光

注意事項

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

 

 

 

 

 

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